在PVN 中注射氟金后，左心室第三側的下丘腦細胞(40倍)抗體為1/50.000.

抗體的儲存和制備

您將收到裝在小瓶中的抗熒光金抗體。這是一種在兔子體內產生的多克隆抗體。小瓶中約有 100ml抗體溶液。應立即冷凍并儲存在寒冷(-20 攝氏度)、黑暗、干燥的環境中。一臺好的商用冰箱的冷凍室(沒有無霜功能)就足夠了。如果正確且持續地冷凍，抗體溶液可以儲存長達一年。

抗體溶液應保持冷凍直至準備使用。100ml抗體的稀釋度為 1/100。抗體可在 BSA稀釋劑(50 mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中進一步稀釋 1/50,000至 1/100,000倍，以產生 50ml至 100ml 的工作滴度。這意味著您可以將收到的溶液稀釋 500 至 1,000 倍。如果您使用 Vector elite 試劑盒，這應該可以處理 300至 1000個切片。制備后，抗體溶液可在陰涼(4攝氏度)、黑暗干燥的環境中保存長達七天。優質商用冰箱的冷藏室就足夠了。我們不建議在制備后七天后使用該溶液。請勿重新冷凍抗體溶液。

抗體的使用

熒光金可通過多種不同方法注射，包括壓力法、離子電滲法和各種研究人員開發的其他應用。參見 Schmued 和 Fallon 的《熒光金:一種具有多種*特特性的熒光逆行軸突示蹤劑》，《腦研究》，377(1986)147-154，以及 Pieribone 和 Aston-Jones 的《熒光金在研究深部腦核傳入神經中的離子電滲應用》，《腦研究》，475(1988)259-271。許多研究人員已經開發出自己的改良程序。抗體的使用不應依賴于使用熒光金的方法。

注射熒光金后，將漂浮切片(我們使用了灌注了 4%甲醛的大鼠的 30 微米切片)與熒光金抗體溶液在4攝氏度下孵育過夜。清洗切片，然后在室溫下以 1/1000 的比例在生物素化 GAR(Vector Labs)中孵育1小時，然后再次清洗。然后將切片以 1/1000 的比例在親和素/生物素(Vector Labs)中孵育1小時，清洗并轉移到 01M酷酸鈉中的二氨基聯苯胺(0,04%)和化鎳(2.5%)中，加入 0.06%H202 六分鐘。然后清洗、安裝、干、脫水并蓋上蓋片。

根據我們的經驗，如果按照上述方式儲存和制備，如果您:使用 Vector elite 試劑盒，每瓶抗體應該可以治療 300到 1000 個 30 微米的白化大鼠腦切片(或類似大小的動物)。但是，您應該嘗試不同的濃度和程序，以確定哪種*適合您的情況。

Ki-67 抗體-W 使用指南和方案

一般的:

Ki-67 抗體-W與 Ki-67 蛋白發生反應。Ki-67蛋白是持續細胞增殖的內在標記，存在于細胞周期的所有活躍階段(G1、S、G2 和有絲分裂)，而不存在于靜息細胞(GO)中。這意味著它是確定特定細胞群生長分數的極*標記。它廣泛用于診斷、研究和藥物發現區用。Ki-67 抗體-W 是多克隆抗體，在兔子體內培養成人類肽序列-TPKEKAOALEDLAGEKELFOT-它在注射到兔子體內之前通過戍二醛與甲狀腺球蛋白偶聯。我們的抗體已用于大鼠和人腦組織的免疫細胞化學。它將與吸收特定肽的濾紙一起出售，用于阻斷。這使研究人員能夠確認特定信號

Ki-67 抗體-W 的表征

A.7日齡大鼠海馬中的 Ki-67 陽性細胞(10X)B.共聚焦顯微鏡下拍攝的海馬中的 Ki-67細胞(60X)

C.海馬中的 Ki-67 阻斷 (10X)

通過阻斷研究確定特異性。將7日齡大鼠海馬的相鄰切片與 Ki-67 抗體-W單獨孵育(A-10X)和(B-60X)或與Ki-67抗體-W與Ki-67 肽預孵育(C-10X)-起孵育。注意 A和 B 中的標記以及 C 中的無標記，表明抗體結合的特異性。

儲存和準備:

您收到的藥瓶中含有約 200ml 溶液，稀釋度為 1/100。Ki-67Antibody-W可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4% Triton、1%BSA、1%NGS)中進一步稀釋至至少 1/20.000。

抗體應儲存在-20C下。還包括用特定肽吸附的濾紙以進行陽斷。可將 500ul稀釋抗體加入管中以達到 10uM 陽斷。在應用于組織之前，在室溫(RT)下孵育至少1小時。該抗體特異性地阻斷此肽，而不會阻斷濾紙上吸附的其他肽。

勢議:

將新鮮冷凍的 10-30 微米切片在室溫下用 4%多聚甲醛(EA)固定1小時，用磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)清洗，然后在 90C下用 10% 檸學酸鈉處理 40 分鐘。將切片在檸標酸鈉溶液中冷卻 20 分鐘，用 PBS 清洗，并與 PBS 中的 0.至 0.3% H202 一起孵育 10 至 30分鐘。再次用 PBS 清洗組織，然后用親和素/生物素陽斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理，清洗后在室溫下用 BSA 稀釋劑孵育1小時。將 Ki67抗體(1/20,000)在室溫下過夜應用于組織。用 PBS 清洗后，將切片在1/1000 生物素化的 GAR(Vector labscat#BA1000)中在室溫下孵育1小時，清洗后在 1/1000親和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中在室溫下孵育1小時。

Ki-67 抗體-W也適用于 Fluorochrome,LLG銷售的 BRDU 抗體-W可視化方案。但是，可以使用 4% FA 灌注組織代替新鮮冷凍切片。

出版物:

Perez 等人，《神經科學雜志》，2009年5月13日:29(19):6379-6887Garcia-Fuster等人，正在準備中:實驗者注射可*因后成人海馬神經發生的個體差異。

GEAP 抗體-W 使用指南和方案

概述:

GFAP 抗體-W 與膠質纖維酸性蛋白(GFAP)發生反應，GFAP是 I 類中間絲，是星形膠質細胞中中間絲的主要成分，可作為成熟膠質細胞的細胞特異性標記。它可用作神經干細胞和星形膠質細胞的標記，包括許多類型的源自表達 GEAP 的星形膠質細胞的腦腫瘤。GEAP 抗體-W是多克峰抗體，在兔子體內培養成肽序列 NAGEKETRASERAE(人、大鼠和小鼠)，通過成二醛與甲狀腺球蛋白偶聯，然后注射到兔子體內。我們的抗體已用于大鼠和人腦組織的免疫細胞化學。它還將與吸收特定肽的濾紙一起出售，用于陽斷。這使研究人員能夠確認特定信號。

GFAP 抗體-W 的表征

A.成年大鼠海馬中的 GFAP 膠質細胞 (10X)

B.共聚焦顯微鏡下拍攝的海馬中的 GFAP 膠質細胞(60X)

C.海馬中的 GEAP 陽斷 (10)

通過陽斷研究確定特異性。將成年大鼠海馬的相鄰切片單獨與 GEAP 抗體-W(A-10X)和(B-60X)一起孵育，或與 GEAP抗體-W與 GFAP 肽預孵育(C-10X)一起孵育。注意膠質細胞中的A和 B標記以及 C 中無標記，表明抗體結合的特異性。

儲存和準備:

您收到的試劑瓶中含有約 200ul稀釋度為 1/100 的抗體。抗體可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4% Triton、1% BSA、1%NGS)中進一步稀釋至至少 1/30,000。

抗體應儲存在 -20C下。還包括用特定肽吸附的濾紙以進行陽斷。可將 500ml 稀釋抗體加入試管中以達到 10 uM 阻斷。在應用于組織之前，在室溫(RT)下孵育至少1小時。該抗體可特異性地阻斷此肽，而不會阻斷濾紙上吸附的其他肽。

協議:

將新鮮冷凍的 10-80 微米切片在室溫下用 4%多聚甲醛(FA)固定1小時，在磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)中清洗，并與 PBS 中的 0.1至0.3% H202 一起孵育 10 至 30分鐘。再次在 PBS 中清洗組織，然后用親和素/生物素陽斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理，清洗后在室溫下用 BSA稀釋劑孵育1小時。將 GEAP 抗體-W(1/30,000)在室溫下應用于組織過夜。在 PBS 中清洗后，將切片在室溫下在 1/1000 的生物素化 GAR (Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小時，清洗后在室溫下在 1/1000 的親和素/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中孵育1小時。清洗后，用 0.1M乙酸鈉中的二氨基聯苯胺(0.04%)與 0.06% H202 混合溶液浸泡六分鐘以觀察信號(也可添加 2.5%的氯化鎳)。

GFAP抗體-W也適用于 Fluorochrome,LLG 銷售的 BRDU抗體-W可視化方案。但是，可以使用 4% FA 灌注組織代替新鮮冷凍切片。

BrdU 抗體-W 使用指南和方案

概述:

該抗體與合成的胸苷類似物 BrdU 發生反應，當 BrdU 注射到動物體內時，它會在細胞周期的S期被整合到活躍增殖細胞的新合成DNA 鏈中。可以通過免疫細胞化學測量存活的細胞數量。作為評估一組細胞增殖狀態的出色工具，它已成為藥物發現研究的關鍵，尤其是在癌癥治療和 ADME/TOx 研究期間確定細胞健康狀況方面。BrdU 抗體-W 是在兔體內產生的多克隆抗體，可抵抗與牛血清白蛋白(BSA)結合的 BrdU。我們的抗體已用于大鼠腦組織的免疫細胞化學。它將與吸收了 BrdU 的濾紙一起出售，用于阻斷。這使研究人員能夠確認特定信號。

BrdU 抗體-W 的表征

A.成年大鼠齒狀回中的 BrdU 陽性細胞(60X)，之前已注射 BrdU。共聚焦顯微鏡拍攝的照片B.齒狀回中的 BrdU 阻斷

通過進行陽斷研究確定特異性。將之前注射過 BrdU 的成年大鼠海馬的相鄰切片單獨與 BrdU 抗體-W(A-60X)孵育，或與與 BrdU 預孵育的 BrdU 抗體-W(B-60X)孵育。注意A中的標記和 B中的無標記，表明抗體阻斷的特異性。

儲存和準備:

您收到的試劑瓶中含有約 200ml的稀釋度為 1/100 的試劑。BrdU Antibody-W可在 BSA稀釋劑(50mM KPBS、0.4%Triton、1% BSA、1% NGS)中進一步稀釋至至少 1/80,000。

抗體應儲存在 -20C下。還包括用 BrdU 吸附的用于封閉的濾紙。可將 500m1稀釋抗體加入試管中，以達到 10 μM 封閉。在應用于

組織之前，在室溫(RT)下孵育至少1小時。該抗體特異性地封閉 BrdU，而不會封閉濾紙上吸附的其他肽。

勢議:

將新鮮冷凍的 10-80 微米切片在 4%多聚甲醛(EA)中在室溫下固定1小時，在磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)中清洗，然后在 65C下用50% 甲酰胺/2X SSC(300 mM 氫化鈉和 30 mM 檸檬酸鈉)處理 2小時。將切片在 2X SSC 中清洗，在 37C下在 2N HCL中孵育 80 分鐘，然后在室溫下直接放入 100mM 硼酸鈉(pH 8.5)中 10 分鐘。將切片在 PBS 中清洗，并與 PBS 中的 0.1至 0.3%H202.孵育 10 至 80 分鐘。再次在 PBS 中清洗組織，然后用親和素/生物素陽斷試劑盒(Vector-cat #SP-2001)處理，清洗并與BSA 稀釋劑在室溫下孵育1小時。將 BrdU 抗體-W(1/30,000)在室溫下過夜應用于組織。在 PBS 中清洗后，將切片在室溫下在1/1000 的生物素化 GAR(Vector labs-cat#BA1000)中孵育1小時，

*注意:熒光金、熒光金抗體、熒光紅寶石、KI-67 抗體-W、GEAP 抗體-W和 BrdU 抗體-W 僅供實驗室研究動物或體外試驗研究使用。不得用于人體。這些藥物應僅供定期從事神經解剖學研究和體外試驗的人員或僅用于實驗室研究的動物使用。